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Invitrogen NativePAGE Bis-Tris 凝膠系統(tǒng)是一種預(yù)制聚丙烯酰胺小型凝膠系統(tǒng)，可對(duì)非變性蛋白和蛋白復(fù)合物進(jìn)行靈敏的高分辨率分析、分子量估算和純度評(píng)估。該系統(tǒng)由 Scha?gger 和 von Jagow 在藍(lán)色非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 (BN PAGE) 技術(shù)的基礎(chǔ)上開發(fā)而成，具有近中性的操作 pH 和去污劑兼容性，突破了傳統(tǒng)非變性電泳的限制。

NativePAGE Bis-Tris 凝膠的工作原理

在 SDS-PAGE 中，SDS 充當(dāng)電荷轉(zhuǎn)移分子，它可以讓蛋白帶凈負(fù)電荷，從而使蛋白變性并向陽極遷移。BN PAGE 采用考馬斯 G-250 染料作為電荷轉(zhuǎn)移分子，該染料附著在蛋白上使其帶凈負(fù)電荷，同時(shí)保持蛋白處于非變性、天然狀態(tài)。NativePAGE Bis-Tris 凝膠系統(tǒng)具有近中性 pH 環(huán)境，可以為蛋白和凝膠基質(zhì)提供較大穩(wěn)定性，從而對(duì)非變性膜-蛋白復(fù)合物進(jìn)行高度靈敏的分析，且相對(duì)于傳統(tǒng) Tris-glycine 凝膠系統(tǒng)能夠提供出色的條帶分辨率。

我們推薦使用用于傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)印的 NuPAGE 轉(zhuǎn)印緩沖液和 PVDF，以將蛋白轉(zhuǎn)印到膜上。NuPAGE 轉(zhuǎn)印緩沖液可維持電泳過程中建立的中性 pH 環(huán)境。硝酸纖維素膜與印跡膜不兼容，因?yàn)橄跛崂w維素膜與考馬斯 G-250 染料結(jié)合得非常緊密?；蛘?，也可使用 Invitrogen Power Blotter (PB0013) 進(jìn)行快速半干轉(zhuǎn)印或使用帶 PVDF 膜的 iBlot 2 凝膠轉(zhuǎn)印儀 (IB21001) 進(jìn)行快速干轉(zhuǎn)印。

NativePAGE Bis-Tris預(yù)制膠系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)包括：

?寬分子量分析范圍：15–10,000 kDa

? 中性pH分離，能夠更好地保持蛋白復(fù)合物的非變性狀態(tài)

? 可分離凝膠中不同等電點(diǎn)(pI)的所有蛋白

?能夠在非變性構(gòu)象中對(duì)膜-蛋白復(fù)合物進(jìn)行分析

? 能獲得比傳統(tǒng)tris-甘氨酸非變性電泳更高的分離度