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人原代肝細(xì)胞的Nucleofector電轉(zhuǎn)實例分享

發(fā)布時間 :2021-21-05

正常的原代細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞更能代表體內(nèi)細(xì)胞的功能。利用原代細(xì)胞研究相關(guān)通路的分子機制是更加可靠的。盡管大多數(shù)增殖的、腫瘤來源的細(xì)胞系可以通過標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染方法(如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或聚乙烯亞胺IPE)輕松轉(zhuǎn)染,但轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。原代人肝細(xì)胞(PHH)是臨床前藥物開發(fā)中確定藥物代謝、轉(zhuǎn)運和毒性的“金標(biāo)準(zhǔn)”體外模型。

然而,正如非分裂原代細(xì)胞都難以轉(zhuǎn)染一樣,使用者面臨在保持肝細(xì)胞分化和特化功能的同時又要達(dá)到高效轉(zhuǎn)染的挑戰(zhàn)。原代肝細(xì)胞對操作和環(huán)境變化非常敏感,因此成功轉(zhuǎn)染這些細(xì)胞是非常困難的。

為了滿足使用Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)轉(zhuǎn)染人原代肝細(xì)胞的需要,在這篇描述了保持細(xì)胞功能下的兩個電轉(zhuǎn)程序:DS-150和EX-147。


圖1. D- NucleofectorTM System and transfection procedure


用熒光顯微鏡分別檢測pmax GFPTM質(zhì)粒DNA和Cleancap mCherry RNA的轉(zhuǎn)染效率;并分析細(xì)胞活力、膽汁管形成、白蛋白分泌和CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6代謝產(chǎn)物的生成。


圖2. Image of CLF-staining were combined with corresponding pictures of red mCherry fluorescence


使用DS-150程序?qū)NA的電轉(zhuǎn)效率高達(dá)20%,對mRNA的電轉(zhuǎn)效率高達(dá)85%,并持續(xù)培養(yǎng)7天。在最初的轉(zhuǎn)染后,觀察到存活率、白蛋白分泌和CYP3A4活性的輕微下降,在7天的療程后恢復(fù)。轉(zhuǎn)染的PHH形成了復(fù)雜的、分支狀的膽管網(wǎng)絡(luò),并在整個培養(yǎng)過程中保持了良好的形態(tài)。

為了達(dá)到更高的效率,使用EX-147程序,在轉(zhuǎn)染后24小時DNA轉(zhuǎn)染效率高達(dá)68%。然而,隨著時間的推移與未轉(zhuǎn)染對照相比,細(xì)胞活力和特征性肝功能降低,限制了該項目用于短期研究。


綜上所述,對于原代肝細(xì)胞,我們開發(fā)了“高效DNA程序”和“高功能mRNA程序”,有效的DNA和mRNA表達(dá)并保留功能長達(dá)7天,從而改善了主要人類肝細(xì)胞在藥物代謝機制研究中的使用。

Lonza不僅能提供高質(zhì)量的起始材料,以確保肝細(xì)胞的高活性和功能性,也提供溫和高效的轉(zhuǎn)染處理過程。





Lonza原代細(xì)胞業(yè)務(wù)

01 龐大的細(xì)胞種類和供者庫

歡迎點擊閱讀原文,索取Lonza“原代細(xì)胞及培養(yǎng)基目錄”或 “原代細(xì)胞和細(xì)胞系轉(zhuǎn)染手冊”。

02 易于獲取

圖片

03 易于使用

每種細(xì)胞均有適用的培養(yǎng)基供您選擇


04 定制服務(wù)


05 完全合規(guī)的資質(zhì)和文件



參考文獻(xiàn)

1. Gresch O, Enfel FB, Nesic D, Tran TT, England HM, Hickman ES, et al. New non-viral method for gene transfer into peimary cells. Methods. 2004; 33(2):151-163

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