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正常的原代細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞更能代表體內(nèi)細(xì)胞的功能。利用原代細(xì)胞研究相關(guān)通路的分子機制是更加可靠的。盡管大多數(shù)增殖的、腫瘤來源的細(xì)胞系可以通過標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染方法(如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或聚乙烯亞胺IPE)輕松轉(zhuǎn)染，但轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。原代人肝細(xì)胞(PHH)是臨床前藥物開發(fā)中確定藥物代謝、轉(zhuǎn)運和毒性的“金標(biāo)準(zhǔn)”體外模型。

然而，正如非分裂原代細(xì)胞都難以轉(zhuǎn)染一樣，使用者面臨在保持肝細(xì)胞分化和特化功能的同時又要達(dá)到高效轉(zhuǎn)染的挑戰(zhàn)。原代肝細(xì)胞對操作和環(huán)境變化非常敏感，因此成功轉(zhuǎn)染這些細(xì)胞是非常困難的。

為了滿足使用Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)轉(zhuǎn)染人原代肝細(xì)胞的需要，在這篇描述了保持細(xì)胞功能下的兩個電轉(zhuǎn)程序:DS-150和EX-147。

圖1. D- Nucleofector^TM System and transfection procedure

用熒光顯微鏡分別檢測pmax GFP^TM質(zhì)粒DNA和Cleancap mCherry RNA的轉(zhuǎn)染效率；并分析細(xì)胞活力、膽汁管形成、白蛋白分泌和CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6代謝產(chǎn)物的生成。

圖2. Image of CLF-staining were combined with corresponding pictures of red mCherry fluorescence

使用DS-150程序?qū)NA的電轉(zhuǎn)效率高達(dá)20%，對mRNA的電轉(zhuǎn)效率高達(dá)85%，并持續(xù)培養(yǎng)7天。在最初的轉(zhuǎn)染后，觀察到存活率、白蛋白分泌和CYP3A4活性的輕微下降，在7天的療程后恢復(fù)。轉(zhuǎn)染的PHH形成了復(fù)雜的、分支狀的膽管網(wǎng)絡(luò)，并在整個培養(yǎng)過程中保持了良好的形態(tài)。

為了達(dá)到更高的效率，使用EX-147程序，在轉(zhuǎn)染后24小時DNA轉(zhuǎn)染效率高達(dá)68%。然而，隨著時間的推移與未轉(zhuǎn)染對照相比，細(xì)胞活力和特征性肝功能降低，限制了該項目用于短期研究。

綜上所述，對于原代肝細(xì)胞，我們開發(fā)了“高效DNA程序”和“高功能mRNA程序”,有效的DNA和mRNA表達(dá)并保留功能長達(dá)7天，從而改善了主要人類肝細(xì)胞在藥物代謝機制研究中的使用。

Lonza不僅能提供高質(zhì)量的起始材料，以確保肝細(xì)胞的高活性和功能性，也提供溫和高效的轉(zhuǎn)染處理過程。

Lonza原代細(xì)胞業(yè)務(wù)

01 龐大的細(xì)胞種類和供者庫

歡迎點擊閱讀原文，索取Lonza“原代細(xì)胞及培養(yǎng)基目錄”或 “原代細(xì)胞和細(xì)胞系轉(zhuǎn)染手冊”。

02 易于獲取

03 易于使用

每種細(xì)胞均有適用的培養(yǎng)基供您選擇

04 定制服務(wù)

05 完全合規(guī)的資質(zhì)和文件

參考文獻(xiàn)

1. Gresch O, Enfel FB, Nesic D, Tran TT, England HM, Hickman ES, et al. New non-viral method for gene transfer into peimary cells. Methods. 2004; 33(2):151-163

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